引言：分枝桿菌屬（Mycobacterium）是一類細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌，因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名。細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色后能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸桿菌，且不易破壁。本次實(shí)驗(yàn)ATS破壁機(jī)將樣品做兩部分處理，對(duì)比破壁結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)對(duì)象

■ 胞內(nèi)分枝桿菌

實(shí)驗(yàn)儀器

■ 高速離心機(jī)

■ ATS破壁機(jī)

■ 顯微鏡

實(shí)驗(yàn)背景

分枝桿菌屬（ Mycobacterium）是一類細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿菌，因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名。本菌屬的顯著特性為：①細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)；②無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，也不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素；③對(duì)人致病的主要有結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌；④所致感染多為慢性過(guò)程，長(zhǎng)期遷延并有破壞性的組織病變。

實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)

細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色后能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸桿菌，且不易破壁。

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

將胞內(nèi)分枝桿菌進(jìn)行破壁，后續(xù)提取蛋白。

實(shí)驗(yàn)工藝

1. 預(yù)處理：將滅活后的胞內(nèi)分枝桿菌液體（非結(jié)核)分為兩部分，一部分不作處理；一部分做堿處理，離心后去上清加水再重懸。

2. 實(shí)驗(yàn)工藝：ATS破壁機(jī)搭配一級(jí)模塊后，控低溫處理。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

A. 未處理的菌液破壁結(jié)果

通過(guò)對(duì)菌液進(jìn)行抗酸染色后觀察，破壁前菌液呈紫色，在破壁次數(shù)相同的條件下，隨著壓力的增高，胞內(nèi)分枝桿菌顏色偏向藍(lán)色。

100倍油鏡顯示，壓力越高，破壁效果越好。（壓力排序：A

破壁前

破壁后

B.堿處理菌液破壁結(jié)果

同壓力同次數(shù)下，堿處理后的菌液破壁效果明顯提高。

（堿處理）

（未處理）

實(shí)驗(yàn)小結(jié)

1. 從染色結(jié)果和顯微鏡觀察結(jié)果可以看出，未處理的菌液經(jīng)不同壓力處理后，都有一定程度的細(xì)菌破壁，且壓力越高，破壁效果越好。

2. 堿處理有助于破壁，比同壓力未處理的菌液破壁結(jié)果更好，細(xì)胞更細(xì)碎。